随着基因工程的快速发展,以CAR-T为代表的细胞治疗目前备受关注,基本原理是在体外使用基因工程技术手段,将患者的T细胞进行一系列改造,使其表面表达可以特异性识别靶抗原的CAR(嵌合抗原受体),在回输至患者体内后,具备靶向识别肿瘤相关抗原(TAA)并激活内部信号通路,释放颗粒酶、穿孔素等执行杀伤功能,从而发挥靶向杀伤作用。
而随着免疫学的深入研究,CAR序列不再局限“装载”在T细胞上,以CAR技术为核心的新型细胞疗法,CAR-NK、CAR-NKT、CAR-巨噬细胞(CAR-M)、CAR-Treg、CAR-γδT等异军突起,在免疫治疗中展现出广阔的应用前景。
CAR表达的阳性率作为CAR细胞质量环节中关键的一环,决定着细胞治疗临床阶段的成败,在国家相关法规文件中有明确的检测要求。CAR阳性率的检测贯穿CAR细胞类药物的整个研发、生产周期:如早研阶段中,转导/转染后的car表达情况、CMC阶段CAR细胞药物质量评估、临床阶段的PK评估等。因此,选择准确、快捷、方便的CAR阳性率检测方法尤为重要。
CAR序列的结构
CAR分子是模块化合成,由胞外抗原结合域、铰链区、跨膜结构域、胞内信号结构域。其中胞外的抗原结合域单链可变片段scFv由可变域VH、VL和连接子linker组成,其赋予CAR细胞针对特定抗原的识别能力。
CAR分子在针对不同肿瘤靶点上,scFv中的VH、VL会有不同的序列设计,这需要针对每一次的产品迭代,来开发及独特型验证的car阳性率检测试剂,才能检测CAR在细胞表面的表达情况,这个过程将会导致检测成本高、耗时时间久、特异性不强等导致研发进度延迟。那是不是有通用性的检测位点来确认CAR的表达呢?答案是肯定的。scFv中的linker的氨基酸序列是固定,其不会随着不同的肿瘤相关抗原靶点发生改变,因此,可以使用抗linker抗体方式来特异性检测CAR的阳性率。
Linker类型
根据氨基酸序列的差异,linker可分为两类:一种是(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n,即4个Gly+1个Ser重复n次组成的氨基酸序列,形成的柔性linker;另一种是Whitlow Linker 序列(此处不做介绍)。
赛笠生物针对CAR阳性率检测痛点,推出一款使用简单、高效、通用性强的CAR阳性率检测抗体:Anti-G4S linker(905-5)mAb,可以特异识别含有G4S的连接子,用于CAR的表达情况检测。
产品信息
产品名称:
Anti-G4S linker(905-5)mAb
抗体类型/亚型:
兔单克隆抗体 IgG
特异性/敏感性:
可特异性结合外源表达的含(G4S)n (n≥2) linker 的 CAR 分子
产品来源:
使用合成串联 G4S linker 多肽,免疫新西兰大白兔得到
荧光检测通道:
APC、PE、裸抗
产品特性
高通用性:
不同靶点、不同抗体类型的CAR均可检测(含(G4S)n,n>2)
高灵敏性:
检测灵敏度高,非特异性背景值低
多样化:
有APC、PE等荧光偶联的抗G4S抗体供选择
高稳定性:
批间一致性高,偶联后的抗体均经过纯化处理。
检测CAR-NK细胞阳性率数据
CAR-NK细胞阳性率检测结果显示:极低浓度G4S linker(905-5)Rabbit mAb ( 0.37 ug/mL) 即能充分检测CAR阳性率。
进口竞品对比数据
1、我司PE通道的Anti-G4S linker流式抗体检测CD19 CAR+荧光信号更强。
2、流式测定与C公司的CD19 CAR+阳性率接近,我司检测细胞分群更加明显。
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